服务介绍:
慢病毒载体可将外源目的基因整合至宿主基因组,实现基因长期稳定表达。本服务包含载体构建、质粒扩增、293T 细胞转染、病毒收集浓缩纯化、滴度检测,交付高活性过表达慢病毒,适用于肿瘤、干细胞、原代细胞等多种细胞的基因过表达研究。
实验原理:
采用慢病毒三质粒包装系统:目的基因表达载体 + gag/pol 包装质粒 + VS V-G 包膜质粒。三种质粒共转染 293T 包装细胞,细胞内转录翻译组装形成携带目的基因的慢病毒颗粒;收集细胞上清,经过滤、浓缩纯化后检测病毒滴度。病毒感染靶细胞后,逆转录形成 DNA 整合到宿主基因组,持续表达目的基因。
客户需提供信息:
- 目的基因 ID / Gene Name、物种(人 / 小鼠 / 大鼠等);
- 基因序列或参考转录本编号;
- 载体骨架选择(常用 pLVX、pCDH 等,可选荧光标记 / 抗性筛选);
- 筛选标记:Puromycin 嘌呤霉素、GFP、mCherry 等;
- 特殊要求:密码子优化、截短体、点突变请提前说明。
交付内容:
- 重组过表达质粒(甘油菌 + 质粒,含测序报告)
- 浓缩慢病毒原液
- 病毒滴度检测报告
- 完整实验报告(载体图谱、测序峰图、包装记录、滴度结果)
注意事项:
- 基因毒性蛋白:部分基因对 293T 细胞有毒性,会降低病毒滴度,下单前需评估;
- 慢病毒不能感染非分裂细胞之外的所有细胞,原代细胞感染效率需提前评估;
- 慢病毒属于生物安全二级,客户需具备对应的生物安全操作条件;
- 不承诺 100% 感染效率,感染效率受靶细胞类型、MOI、细胞状态影响;
- 若需要阴性对照病毒(空载),可同步打包订购。