服务介绍:
Western Blot(蛋白免疫印迹)是外泌体鉴定经典实验技术。通过凝胶电泳分离蛋白,转膜后使用特异性抗体孵育,检测目标蛋白,常用于外泌体标志物鉴定,区分外泌体与杂质蛋白,验证外泌体制备质量,支持外泌体相关文章发表。
检测原理:
外泌体蛋白样本经 SDS‑PAGE 凝胶电泳,按分子量大小分离蛋白;再将蛋白转印至 NC/PVDF 膜;加入一抗特异性结合目标蛋白,二抗结合一抗,经化学发光显影,得到蛋白条带,判断目标蛋白是否存在及相对表达水平。
样本要求:
- 样本:纯化外泌体沉淀或 PBS 重悬外泌体样本;
- 样本建议蛋白总量≥20μg / 样本;
- 样本无蛋白酶污染,避免反复冻融;
- 干冰低温寄送,运输过程保持低温;
- 请提前告知需要检测的靶标蛋白名称(如 CD63、CD81、TSG101、Alix 等)。
交付内容:
- 原始 WB 发光胶片 / 化学发光图片(tif 原图)
- 蛋白条带标注图
- 完整实验报告,包含实验流程、结果说明
注意事项:
- 样本纯度会直接影响结果,杂质蛋白过多会产生非特异性杂带;
- 抗体由我方提供,若为特殊小众靶标,需提前沟通抗体可行性;
- WB 为定性 / 半定量实验,如需精确定量,可搭配 BCA 蛋白定量;
- 建议至少选择 2~3 种外泌体标志物联合鉴定,满足期刊发表要求。